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我不是米人，我的米都在老婆的口袋里，老婆说如哪台咱就如哪台
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2011年终总结
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专利名称3-羟基-2-氨基苯甲酸的新的衍生物，其制备方法及用途的制作方法
3-羟基-2-氨基苯甲酸的新的衍生物，其制备方法及用途本发明涉及3-羟基-2-氨基苯甲酸，3-HANA，的新的衍生物，其制备方法、新的药物组合物以及将其用于抑制3-羟基-2-氨基苯甲酸盐氧合酶、3-HAO的用途，该酶导致内源神经毒素喹啉酸、QUIN的产生。
3-HAO为色氨酸降解代谢途径中的酶，该酶造成了3-羟基-2-氨基苯甲酸向喹啉酸的转化。QUIN及其生物合成酶3-HAO在啮齿动物以及在人脑组织中中均已被发现。QUIN通过N-甲基-O-天冬氨酸盐(NMDA)受体作用，是一种有效的外毒素，并且近来已以其做为在神经变性紊乱中的一种病原体这一假想角色得到注意，上述神经变质紊乱的例子有亨廷顿舞蹈症、中风/大脑局部缺血、缺氧、早老性痴呆症及AIDS痴呆综合症。3-HAO活性抑制剂对于可归因于喹啉酸过剩的疾病具有显而易见的治疗价值。
4-卤代基质类似物做为3-HAO活性抑制剂已被描述。1980年，由Parli
CJ，Krieter
P和Schmedt
B在“6-氯色氨酸新陈代谢为4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸一种3-羟基-2-氨基苯甲酸氧化酶的有效抑制剂”，(Arch
203，161-166页，1980)中披露为6-氯色氨酸的一种代谢产物的4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸，是老鼠及豚鼠的肝脏和肾脏中的3-HAO的一种有效抑制剂。此后，Heyes
SP.在“4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸盐抑制脑3-羟基-2-氨基苯甲酸盐氧化酶“(Neurochem
Int13，405-408页，1988)中证实4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸同样是老鼠脑3-HAO的一种抑制剂。1989年，Todd
WP，Carpenter
BK和Schwarcz
R在“4-卤代-3-羟基-2-氨基苯甲酸盐的制备及其在老鼠和人脑组织中对3-烃基-2-氨基苯甲酸盐氧合酶活性抑制的证实”(Prep
19，155-165页，1989)中表明4-氟、4-氯及4-溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸对在老鼠体内及人脑内的3-HAO具有非常相近的阻碍效力。
本发明涉及能够抑制酶3-HAO的化合物，这些化合物的IC50值高于现有技术的化合物。
因而本发明是关于通式Ⅰ的化合物或其药物可接受的盐
其中，R1和R2为相同或不同并选自H和烷基;及X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
本发明的另一个目的是制备式Ⅰ化合物的方法，该方法通过A)如果R1和R2为相同的或不同的并选自H和烷基，Y选自Cl，Br和I，X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3;
卤化式Ⅱ化合物
其中R1，R2和X如上A)中定义，或B)如果R1和R2为H，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;
除去式Ⅲ化合物保护基
其中R1，R2，X和Y如上B)中定义，且PG为保护基，或C)如果R1和R2为H，X和Y为相同的或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;
还原式Ⅳ化合物
其中X和Y如上C)中定义，或D)如果R1和R2为相同的或不同的并选自H和烷基，X为氯，溴或碘和Y为选自烷氧基、烷基、氟烷基和卤素;
卤化式Ⅴ化合物
其中R1、R2和Y如上D)中定义，或E)如果R1为烷基，R2为H或烷基，X与Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;
将式Ⅵ化合物烷基化
其中X和Y如上E)中定义，或F)如果R1和R2为相同的或不同的并选自H和烷基，X和Y为相同的或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;
将式Ⅶ化合物脱去酯基
其中R1、R2、X和Y如上G)中定义，且R3选自烷基、苄基、1，1，1-三氯乙基和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)。
本发明还与药物制剂有关，该制剂含为活性组分的式Ⅰ化合物及药用可接受的载体，及所述化合物用于制成药剂预防或治疗神经变质症的用途。
本发明的进一步的目的是合成制备式Ⅰ化合物的中间体，即通式Ⅱ化合物
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3，但须将其中R1和R2为H，和X为OMe、OEt、Cl、Br或F的式Ⅱ化合物排除在外。
通式Ⅲ化合物
其中X和Y为相同或不同的，并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3，和PG为保护基，但须将其中PG为甲基、X为OMe和Y为OMe;PG为Me，和X和Y为Cl;及PG为Me，X为OMe和Y为Cl的式Ⅲ化合物排除在外。
通式Ⅳ化合物
其中X和Y为相同或不同的，并选自于烷氧基、烷基、烷基硫代，氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
通式Ⅴ化合物
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，且Y选自烷氧基、烷基、氟烷基和卤素。
通式Ⅵ化合物
其中X和Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3，及通式Ⅶ化合物
其中R1和R2为相同或不同的，并选自H和烷基，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3及R3选自烷基、苄基、1，1，1-三氯乙基和SEM。
在上述通式中“烷基”可以代表直链或支链低级烷基，优选的是C1-C6烷基。该低级烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基和直链、支链的戊基及乙基。
此外，上述通式中“烷氧基”可以代表低级烷氧基，优选的是C1-C6烷氧基。所述低级烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基，异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基和直链、支链的戊氧基及己氧基。
在上述通式中“卤素”可以选自碘、氟、氯和溴。
根据本发明，最优选的式Ⅰ化合物为;
5-溴-4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸，＜4，5-二氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸，＞4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-氨基苯甲酸，4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸，4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸，4，5-二溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸，及其药用可接受的盐。
目前已知的实施本发明的最佳方案为使用5-溴-4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸，4，5-二氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸，4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸或4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸。
本发明的化合物可被用于与神经变质的治疗或预防的有关方面，特别是用于某些症状，例如中风、大脑局部缺血、缺氧、癫痫及神经变质症，如早老性痴呆，多级阻塞痴呆、亨廷顿舞蹈症和AIDS痴呆综合症。
制备式Ⅰ化合物的方法将被详细描述如下下式化合物可使用下述方法之一制备，
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X和Y为相同的或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3、SCF3。
方法A式Ⅰ化合物，其中R1和R2为相同或不同，并选自H和烷基，Y选自Cl，Br和I，X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3，可由式Ⅱ化合物制备。
其中R1、R2和X如同方法A中式Ⅰ中的定义。例如使用0°～100℃之间的卤素在乙酸或其它合适的溶剂中的溶液进行卤化，并且当Y＝Br时，可选择使用乙酸中的吡啶鎓氢溴盐过溴化物或使用三氟乙酸中的Br2和三氟甲烷磺酸汞。碘化可通过用Icl或I2和三氟甲烷磺酸银处理来完成。
方法B其中R1和R2为H，X和Y为相同的或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3的式Ⅰ化合物可由式Ⅲ化合物制备，此处PG为例如烷基、2-(三甲基硅)乙氧基甲基(SEM)，甲氧基甲基(MOM)，2-(甲氧基)乙氧基甲基(MEM)，苄基(Bn)
且X和Y如方法B中式Ⅰ中的定义，另外羟基可被保护为OPG，例如通过使用质子酸，如48% HBr，55%HI，或如BBr3的Lewis酸，或使用烷基SNa或芳基SNa以除去保护基，再调节pH得到游离的2-氨基苯甲酸衍生物。当PG＝SEM时，可通过使用氟化四丁基铵(TBAF)或在合适的溶剂，例如N，N-二甲基丙烯基脲(DMPU)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中的CsF在高温下反应除去保护基。苄基可使用如H2和Pd/C为催化剂氢解除去。
方法C其中R1和R2为氢，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF和SCF3的式Ⅰ化合物可由式Ⅳ化合物制备。
(此处X和Y如同方法C中式Ⅰ中的定义)例如通过在一种适宜的溶剂如EtOH或EtOAc中，大气压至高压之间，使用H2和一种催化剂如Pd或PtS2/C式Raney镍进行还原。还原还可通过在适宜溶剂如EtOH中的SnCl2或NH2NH2·H2O反应来完成。
方法D其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X＝Cl，Br或I及Y选自烷氧基、烷基、氟烷基和卤素的式Ⅰ化合物可由式Ⅴ化合物制备，
此处R1、R2和Y如同方法D中式Ⅰ中的定义。如使用乙酸中的Br2和HBr或乙酸中的Cl2和HCl在高温下进行卤化，或者可使用三氯乙酸中Br2式I2和三氟甲烷磺酸汞在室温或高温下卤代Y。
方法E其中R1＝烷基，R2＝H2或烷基和X，Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3的式Ⅰ化合物可由式Ⅵ化合物(此处X和Y如方法E中式Ⅰ中定义)制备，
例如使用对应于R1和R2的的醛及在适宜的溶剂如CH3CN、H2O或MeoH中的还原剂如NaCNBH3和HCl进行还原烷基化。一和二-N烷基化衍生物可用例如色谱来分离。
方法F其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3的式Ⅰ化合物可由式Ⅶ化合物(此处R1、R2、X和Y如方法F中式Ⅰ中的定义，且R3选自烷基、苄基、1，1，1-三氯乙基和SEM)制备。
例如可用在适宜溶剂如MeOH中的碱，如KOH，在室温或高温下;或用高温下的质子酸如48%HBr;或用烷基SNa或芳基SNa进行脱酯基反应。如果此处R3为苄基，可用如H2和Pd/C进行氢解得到羧酸。1，1，1-三氯乙基酯可被如HOAc中的Zn分解和用如在DMPU中的TBAF分解SEM-酯。
中间体方法Ⅱa
其中R1和R2＝H的式Ⅱ化合物可由式Ⅷ化合物(其中X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3)通过如根据方法C的还原反应制备。
方法Ⅱb式Ⅱ化合物可根据方法B由式Ⅸ化合物制备。
其中R1和R2为相同或不同并选自H和烷基，PG＝烷基、SEM、MEM、MOM、Bn和X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
方法Ⅲa其中PG＝Me的式Ⅲ化合物可由式Ⅹ化合物制备。
其中X和Y为相同或不同并选自烷氧基、烷基、氟烷基、卤素、羟基(被保护为OMe或OBn)和OCF3。例如通过与水中的水合三氯乙醛、NH2OH·HCl和浓HCl(还可以有Na2SO4存在)，在高温下反应，然后高温下与H2SO4反应，最后在高温下与NaOH和H2O2反应。在本方法中最后调节pH以得到游离的2-氨基苯甲酸衍生物。
方法Ⅲb式Ⅲ化合物可由DMG＝COtBu、CO2tBu、PG＝烷基、SEM、MEM、MOM的式Ⅵ化合物制得。
其中X和Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氯、氟、氟烷基、羟基(被保护为OPG)和OCF3。例如通过与适宜的溶剂(例如四氢呋喃THF)中的烷基锂在低温下反应。芳基锂衍生物再与CO2(固体)反应，酸化并且DMG基团通过用HCl水溶液在高温下除去。
方法ⅢC式Ⅲ化合物可由式Ⅻ化合物制备，PG＝Me、SEM、MOM、MEM
其中X和Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氯、氟、氟烷基、羟基(保护为OPG)和OCF3。例如通过与低温下适宜溶剂(如THF)中的烷基锂反应，然后将芳基锂衍生物与三甲基甲硅烷基甲基叠氮化物(TMSCH2N3)或如甲苯磺酰基叠氮化物反应，再将其还原为相应的胺。该噁唑烷可被HCl水溶液水解(然后调节pH值)得到2-氨基苯甲酸衍生物。
方法Ⅲd式Ⅲ化合物可由PG＝烷基、SEM、MEM、MOM的式ⅩⅢ化合物(其中X和Y为相同或不同并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3)制备。
例如通过与HNO3在室温至100℃之间进行反应，然后根据方法C还原硝基而制得。
方法Ⅳa式Ⅳ化合物可由式ⅩⅣ化合物制备。
其中X、Y为相同或不同并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3及R3＝H或烷基。例如通过根据方法Ⅲd的硝化反应而制得。当此处R3＝烷基时，可用碱(如KOH)或浓HCl或HBr在高温下进行水解制得羧酸。
方法Ⅳb式Ⅳ化合物可由式ⅩⅤ化合物制备。
其中X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、卤素、羟基(被保护为OPG)OCF3、SCF3和Y选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、羟基(保护为OPG)，OCF3，SCF3和Z＝卤素、NHCOR或COOR(R＝烷基)。例如通过与水或极性非质子传递溶剂如二甲亚砜(DMSO)或DMF中的碱(如KOH)，在室温和回流温度之间进行反应制得。在有保护基存在时，所述保护基可根据方法B除去。
方法Ⅴa式Ⅴ化合物(其中R1和R2为H或烷基，和Y＝Br、Cl、I)可由式ⅩⅥ化合物
通过如根据方法A的卤化反应制得。
方法Ⅴb式Ⅴ化合物可由式ⅩⅦ化合物制备。
其中R3烷基和Y选自烷氧基、烷基和氟烷基。例如通过先用TsCl和在溶剂(如CHCl3或THF)中的碱如Et3N，在高温下处理得到苯酚甲苯磺酸酯，然后用如NaC10H8(在THF中)，低温下脱去甲苯磺酰基，然后用色谱提纯，最后进行酯的水解。接着调节pH值得到游离态的2-氨基苯甲酸。
方法Ⅶa其中R1、R2、X和Y如同方法A中式Ⅰ中定义的式Ⅶ化合物(其R3同方法F中定义)可由式ⅩⅧ化合物
通过如根据方法A的卤化反应制得。
方法Ⅶb式Ⅶ化合物(其中R1和R2为H和X与Y如方法B中式Ⅰ中定义，R3同方法F中定义)可由式ⅩⅨ化合物
通过如根据方法B的去除保护基反应制得。
方法Ⅶc式Ⅶ化合物(其中R1和R2为H和X与Y如方法C中结构式Ⅰ中定义，及R3同方法F中定义)可由式ⅩⅩ化合物
通过如根据方法C的还原反应制得。
方法Ⅶd其中R1、R2、X和Y同方法D中式Ⅰ中定义且R3同方法F中定义的式Ⅶ化合物可由式ⅩⅪ化合物通过如根据方法D卤化反应制得。
方法Ⅶe其中R1、R2、X和Y同方法E中式I中定义且R3同方法F中定义的式Ⅶ化合物可由式ⅩⅫ化合物通过如根据方法E的烷基化反应制得。
实施例1(方法A)5-溴-4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸将4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸[1](50mg，0.27mmol)溶于HOAc(2.0ml)中，加入47%的HBr水溶液(0.02ml，0.54mmol)，使氨基酸沉淀。加入HOAc(3ml)中的Br2(86mg，0.5mmol)使HBr几乎全部溶解。然后再次沉淀。在室温氮气氛下将反应混合物搅拌两天，用甲苯将乙酸蒸出，粗产品用40%EtOH重结晶。用活性炭处理溶于MeOH中的沉淀，然后蒸去溶剂，得到5-溴-4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸(37mg)，m.p.227-8℃(分解)。1H NMR(CD3OD)δ7.72(s，1H)，5.0(br，4H).13C NMR(CD3OD)δ170.27，143.51，143.10，127.16，125.41，111.04，106.73.MS(TSP)m/z(相对强度)270/268/266(M+，0.28/1.0/0.80).
实施例2(方法A)2-甲氧基-3-三氟甲基苯胺盐酸化物将2-三氟甲基苯甲醚[2](1.00g，5.7mmol)溶于无水THF(90ml)。将溶液冷至-75℃并在5分钟内滴加叔-BuLi(5.0ml，1.3M在戊烷中，6.5mmol)。将反应在-75℃保持1小时，然后将温度升至-20℃两小时，最终升至0℃1小时。将溶液冷至-5℃并滴加TMSCH2N3(0.94ml，6.5mmol)。室温下4小时后，加入水(1.2ml)并将溶剂蒸出。将残余物分布于Et2O(50ml)和水(10ml)中，水相用Et2O(10ml)萃取，合并的醚相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。通过加入HCl(3M在Et2O中)使苯胺以盐的形式沉淀得到2-甲氧基-3-三氟甲基苯胺盐酸化物(598mg)1H NMR(CD3OD)δ7.80(d，J＝7.9Hz，1H)，7.75(d，J＝8.1Hz，1H)，7.51(t，J＝8.0Hz，1H)，5.0(br，1H)，4.03(s，3H).13C NMR-(CD3OD)δ153.10，130.30，129.50，128.20(q，J＝5Hz)，127.27，127.06(q，J＝31Hz)，125.04(q，J＝273Hz)，64.37.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)191(M+，0.76)2-甲氧基-3-三氟甲基-N-新戊酰苯胺将2-甲氧基-3-三氟甲基苯胺盐酸化物(264mg，1.4mmol)溶于CH2Cl2(9.0ml)中，加入1M NaOH(5.0ml)和新戊酰氯(255μl，2.7mmol)并在室温下将反应混合物搅拌2天。用CH2Cl2(60ml)和H2O(15ml)稀释混合物，用1M NaOH(20ml)和盐水(20ml)洗涤有机相，然后用Na2SO4干燥。粗产物用色谱(SiO2，CHCl3-MeOH 45∶1)提纯，得到2-甲氧基-3-三氟甲基-N-新戊酰苯胺(295mg)。1H NMR(CDCl3)δ8.51(d，J＝8.1Hz，1H)，7.96(br，1H)，7.8(d，J＝8.1，1H)，7.18(t，J＝8.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，1.31(s，9H).13C NMR-(CDCl3)δ177.42，147.68，133.69，125.44，125.33，124.23(q，J＝31Hz)，123.94(q，J＝273Hz)，121.84(q，J＝5Hz)，62.51，40.27，27.75.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)275-(M+，0.12)
3-甲氧基-4-三氟甲基新戊酰胺-2-氨基苯甲酸将2-甲氧基-3-三氟甲基-N-新戊酰苯胺(385mg，1.4mmol)溶于无水THF(50ml)中并冷却至-75℃。在-75℃～-73℃下滴加叔-BuLi(2.7ml，1.3M在戊烷中，3.5mmol)。滴加结束后，将温度升至-50℃0.5小时，继而在-20℃停留2.5小时。将溶液冷却并转移至在Et2O中的干冰悬浮液(≈10g在80ml中)中。将反应混合物升温至室温，加入H2O(2ml)并蒸出溶剂。将残余物分布于Et2O(90ml)和H2O(10ml)中，并用水萃取醚相，用Et2O洗涤合并的水相，用ZMHCl酸化至pH3使产物沉淀。将残余物浓缩，有更多的产物沉淀出来，真空干燥后得到3-甲氧基-4-三氟甲基新戊酰胺-2-氨基苯甲酸的总量为182mg，m.p.166.5-7.5℃。1H NMR(CD3CD)δ7.86(d，J＝8.2Hz，1H)，7.68(d，J＝8.4Hz，1H)，4.92(br，2H)，3.86(s，3H)，1.41(s，9H).13C NMR(CD3OD)δ180.88，169.01，156.73，135.78，134.40，129.13(q，J＝31Hz)，127，34，125.89(q，J＝5Hz)，125.05(q;J＝273Hz，62.78，40，49，27，90.MS(TSP)m/z(相对强度)320(M+，0.27).
3-甲氧基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸将3-甲氧基-4-三氟甲基新戊酰胺-2-氨基苯甲酸(190mg)与6M
HCl(80ml)混合并在100℃加热8小时，使其冷至室温过夜。与甲苯共沸蒸馏并真空干燥得到游离碱和3-甲氧基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸的HCl盐的混合物(159mg)。
1H NMR(CD3OD)δ7.83(d，J＝9.0Hz，1H)，6.92(d，J＝8.5，1H)，5.0(br，3H)，3.89(s，3H).13C NMR(CD3OD)δ160.03，140.30，131.07，119.38(q，J＝31Hz)，119.19，115.25(q，J＝273Hz)，112.37，109.07(q，J＝5Hz)，53.14.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)235(M+，0.98)3-羟基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸将3-甲氧基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸(43mg，0.18mmol)与新蒸馏过的48%
HBr(5ml)混合，并在100℃加热14小时。蒸出水和HBr，并将粗产物溶于沸水(3ml)中，用活性炭处理，过滤并蒸发。将残余物溶于EtOH并加入二异丙醚，沉淀出3-羟基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸(18mg)。m.p.200-2℃(分解)。
(dec.).1H NMR(DMSO-d6)δ7.42(d，J＝8.8Hz，1H)，6.69(d，J＝8.8Hz，1H)，3.33(br，4H).MS(EI，70eV)m/z(相对强度)221(M+，0.77)5-溴-3-羟基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸用新蒸馏过的48% HBr(10ml)在100℃，经15小时对3-甲氧基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸(79mg，0.30mmol)脱甲基。蒸发后用真空干燥，将该盐与HOAc(4ml)混合，滴加Br2(96mg，0.60mmol，在3ml HOAc中，)。避光及氩气氛下将反应混合物在室温下放置2天，在40℃放置33小时。蒸发后将粗产物用EtOH-H2O(1.5∶1)重结晶得到5-溴-3-羟基-4-三氟甲基-2-氨基苯甲酸(58mg)。m.p.199-200℃(分解)。
1H NMR(CD3OD)δ7.80(s，1H)，5.0(br，4H).13C NMR(CD3OD)δ170.35，146.26，146.07，130.24，125.44(q，J＝276Hz)，121.04(q，J＝29Hz)，113.73，102.52.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)301/299(M+，0.84/0.83).
实施例3(方法A)4，5-二氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸将4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸[1](150mg，0.80mmol)溶于HOAc(12ml)，用氩气冲洗。加入盐酸(336μl，12M，4.8mmol)，然后滴加Cl2的HOAc溶液(1.78ml，70mg/ml，1.76mmol)氩气氛下，避光下将反应物在室温保持20小时。滤出沉淀并真空干燥。粗产物用EtOH-H2O1∶1重结晶，得到4，5-二氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸(14mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.57(s，1H)，4.98(br，4H).13C NMR(CD3OD)δ170.70，143.58，143.36，124.00，118.68，110.63，109.46.MS(TSP)m/z(相对强度)224/222(M+0.53/1.0).
实施例4(方法A)5-溴-3-羟基-4-甲基-2-氨基苯甲酸向3-羟基-4-甲基-2-氨基苯甲酸[3](251mg，1.5mmol在20ml HOAc中)中加入Br2(719mg，4.5mmol)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。滤出产物并用冷的HOAc洗涤得5-溴-3-羟基-4-甲基-2-氨基苯甲酸(349mg)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.50(br，4H)，7.54(s，1H)，2.26(s，3H).
13CNMR(DMSO-d6)δ168.06，145.61，134.84，130.02，125.45，114.55，17.59.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)247/245(M+，0.77/0.78).
实施例5(方法A)2-(乙基硫代)-6-硝基苯酚将NaNO3(3.13g，36.8mmol)和La(NO3)3·6H2O(0.145g，0.33mmol)溶于水(26ml)和浓HCl(26ml)中。向此溶液中加入溶于105ml二乙醚中的2-(乙基硫代)苯酚(5.16g，33.5mmol)，将反应混合物在室温下搅拌20小时，再用氯仿萃取并用水洗涤。用MgSO4干燥并蒸发后，用SiO2快速色谱提纯粗产物(6.45g)，己烷-乙酸乙酯洗脱得到产物2.23g。用乙酸乙酯-己烷结晶得到分析纯样品。mp＝55.5-57℃。1H NMR(CDCl3)δ8.54(dd，J1＝8.5Hz，J2＝1.7Hz，1H)，7.55(dd，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz，1H)，6.96(dd，J1＝8.6Hz，J2＝7.6Hz，1H)，2.98(q，J＝7.3Hz，2H)，1.34(t，J＝7.3Hz，3H).13C NMRδ153.53，136.80，134.13，129.19，122.75，120.42，26.86，14.51.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)199(M+，0.9)
2-(乙基硫代)-6-硝基苯甲醚将2-(乙基硫代)-6-硝基苯酚(0.7g，3.5mmol)溶于DMF(9ml)中。加入MeI(0.43ml，6.9mmol)和K2CO3(0.94g，6.8mmol)，当将反应混合物在室温下搅拌18小时。蒸发后向残余物中加入乙酸乙酯并滤出盐。再次蒸发得到粗产物(0.98g)，将其用SiO2快速色谱纯化。用己烷-乙酸乙酯洗脱得到产物0.45g。1H NMR(CDCl3)δ7.53(dd，J＝8.0Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.0Hz，1H)，7.14(dd，J＝8.0Hz，1H)，3.94(s，3H)，2.93(q，J＝7.4，2H)，1.32(t，J＝7.4Hz，3H).13C NMR(CDCl3)δ150.87，144.98，136.04，132.27，124.90，122.03，62.35，26.55，14.32.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)213(M+，1.0)3-(乙基硫代)-2-甲氧基苯胺将2-(乙基硫代)-6-硝基苯甲醚(0.59g，2.77mmol)和SnCl2·2H2O(6.2g，27mmol)在乙醇(50ml)中的混合物在回流下加热2小时(氮气氛下)。冷却后加入水并通过加入碳酸氢钠(5%水溶液)使pH值至弱碱性(pH7～8)，然后用乙酸乙酯萃取。干燥(MgSO4)并蒸发得到粗产物0.48g，将其用SiO2快速色谱提纯，用己烷-乙酸乙酯洗脱得产物0.38g).1H NMR(CDCl3)δ6.88(m，1H)，6.63(dd，J＝7.9Hz，1H)，6.56(dd，J＝7.9Hz，1H)，3.82(s，3H)，2.92(q，J＝7.3Hz，2H)，1.33(t，J＝7.3Hz，3H).13C NMR(CDCl3).δ145.11，140.74，131.24，125.52，118.13，114.07，59.44，26.56，14.79.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)183(M+，1.0)
N-(3-乙基硫代-2-甲氧苯基)-新戊酰胺将3-(乙基硫代)-2-甲氧基苯胺(0.25g，1.36mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入新戊酰氯(0.28ml，2.35mmol)和三乙基胺(0.33ml，2.36mmol)，将反应混合物在氮气氛下回流加热20小时。蒸发得到粗产物0.61g，将其用SiO2快速色谱提纯，用己烷-乙酸乙酯洗脱得产物(0.3g)。1H NMR(CDCl3)δ8.18(dd，J1＝8.1Hz，J2＝1.5Hz，1H)，8.08(br，1H)，7.03(dd，J＝8.0Hz，1H)，6.94(dd，J1＝8.0Hz，J2＝1.5Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.90(q，J＝7.5Hz，2H)，1.30(s，9H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H).13NMR(CDCl3)δ177.04，147.07，132.73，130.26，125.61，123.92，118.31，60.55，40.52，28.13，26.85，14.76.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)267(M+，1.0)N-(3-乙基硫代-6-甲氧基羰基-2-甲氧基苯基)-N-甲氧基羰基新戊酰胺氮气氛下，-78℃将叔-丁基锂(3ml，1.5M在戊烷中，4.48mmol)加入N-(3-乙基硫代-2-甲氧苯基)新戊酰胺(0.352g，1.32mmol)的无水THF(6ml)溶液中。将被搅拌的混合物缓慢升至-20℃。4.5小时后加入氯甲酸甲酯(0.51ml，6.6mmol)，然后将反应物升至室温。20小时后加入水，并用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸去有机相得到粗产物(0.51g)，将其用SiO2快速色谱提纯，用己烷-乙酸乙酯洗脱得产物40mg。1H NMR(CDCl3)δ7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4，1H)，3.82(s，3H)，3.75(s，3H)，3.70(s，3H)，2.97(q，J＝7.4Hz，2H)，1.42(s，9H)，1.32-1.41(m，3H)，13C NMR(CDCl3)δ183.66，165.64，155.23，153.09，139.98，135.09，127.78，125.01，124.92，60.88，54.38，52.72，43.98，28.32，25.63，14.16.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)383(M+，0.42)4-(乙基硫代)-3-羟基-2-氨基苯甲酸将N-(3-乙基硫代-6-甲氧基羰基-2-甲氧基苯基)-N-甲氧基羰基新戊酰胺(0.077g，0.20mmol)溶于48%HBr水溶液，并在回流下加热3小时。蒸发得到0.06g产物，将其用SiO2快速色谱提纯，用甲苯-乙酸乙酯洗脱得产物9mg。
1H NMR(CD3OD)δ7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，6.40(d，J＝8.4Hz，1H)，2.63(q，J＝7.4Hz，2H)，1.03(t，J＝7.3Hz，3H).MS(TSP)m/z(rel.int.)214(M+1，1.0)5-溴-4-(乙基硫代)-3-羟基-2-氨基苯甲酸将4-(乙基硫代)-3-羟基-2-氨基苯甲酸(0.007g，0.03mmol)溶于乙酸(0.3ml)中，加入溴(0.0025ml，1.5mmol)并将被搅拌的反应混合物在室温放置5小时，蒸去溶剂和过量的溴得到产物10mg，MS(EI，70eV)m/z(相对强度)291/293(M+，0.65/0.68)。
实施例6(方法C)4-溴-3，5-二乙氧基苯甲酸乙酯在氮气氛、室温下将50ml无水丙酮中的4-溴-3，5-二羟基苯甲酸[4](4.68g，20mmol)，碳酸氢钾(8.28g，60mmol)和硫酸二乙酯(7.84ml，60mmol)搅拌20分钟，然后回流8小时。通过过滤分离出盐并在减压下蒸发滤液。将残余物溶于乙醚并用水、5%氢氧化钠水溶液、水、浓氢氧化铵、水、稀盐酸和水依次洗涤，最后进行干燥(Na2SO4)。除去乙醚得到4-溴-3，5-二乙氧基苯甲酸甲酯2.63g。1H NMR(CDCl3)δ7.22(s，2H)，4.39(q，J＝7.1Hz，2H)，4.18(q，J＝7.0Hz，4H)，1.50(t，J＝7.0Hz，6H)，1.41(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(CDCl3)δ166.75，157.02，130.78，107.91，106.81，65.42，61.60，14.74，14.414-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸氮气氛下将5ml二甲基甲酰胺中的4-溴-3，5-二乙氧基苯甲酸乙酯(1.015g，3.2mmol)加至在25ml二甲基甲酰胺中的乙硫醇钠(4.53g，51.2mmol)中。在100℃将混合物搅拌8小时。冷却后加入水，用1M HCl酸化并用乙醚萃取，用碳酸氢钠水溶液反萃取，用1M HCl酸化再用乙醚萃取。有机相用Na2SO4干燥并浓缩至干。用快速色谱(SiO2，甲苯-乙酸5∶1)提纯得到115mg4-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.13(d，J＝1.8Hz，1H)，6.95(d，J＝1.8Hz，1H)，4.08(q，J＝7.0Hz，2H)，3.4(br，2H)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H).13C NMR(DMSO-d6)δ167.45，156.48，155.81，131.32，109.67，104.47，104.29，64.65，14.57.MS(TSP)m/z 263/261(M+1).
4-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸甲酯在0℃用氯化氢气体使10ml无水甲醇中的(115mg，0.44mol)4-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸饱和，然后在室温下将反应物搅拌过夜。浓缩至干后将残余物溶于氯仿，用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥并浓缩至干得到4-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸甲酯94mg。1H NMR(CDCl3)δ7.35(d，J＝1.8Hz，1H)7.14(d，J＝1.8Hz，1H)，5.85(br，1H)，4.17(q，J＝7.0Hz，2H)，3.91(s，3H)，1.49(t，J＝7.0Hz，3H).13C NMR(CDCl3)δ167.15，156.52，154.38，130.84，110.07，106.03，105.47，65.39，52.70，14.70.(MS(TSP)m/z277/275(M+1).
4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯将4-溴-5-乙氧基-3-羟基苯甲酸甲酯(89.7mg，0.326mmol)的硝基甲烷-二氯甲烷混合物(1∶1，2.0ml)的溶液与90%硝酸(15μl)在40℃搅拌10分钟。加入冰，分出有机相，用氯仿萃取水相，合并的有机相用水洗涤并浓缩。用快速色谱(SiO2，甲苯-乙酸乙酯10∶1)提纯得到4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯37mg。
1H NMR(CDCl3)6.59(s，1H)，4.21(q，J＝7.0Hz，2H)，3.90(s，3H)，1.47(t，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(CDCl3)167.12，162.20，154.36，132.25，126.89，105.35，103.26，66.63，53.94，14.61.
MS(TSP)m/z 339/337(M+NH+4).
4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸将4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯(30.2mg，0.094mmol)溶于乙醇(1.2ml)并加入0.54ml水中的氢氧化钾62mg。在40℃将反应混合物搅拌16小时。冷却后用盐酸酸化溶液至pH 2，然后浓缩至干燥。残余物用水研制，过滤、用水洗涤并干燥得到4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸24.6mg。1H NMR(CD3OD)δ6.82(s，1H)，4.74(br，2H)，4.00(q，2H J＝7.0Hz，2H)，1.26(t，3H J＝7.0Hz，3H)，13C NMR(CD3OD)δ167.31，159.73，150.96，135.28，128.19，106.87，106.30，67.42，15.38.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)307/305(M+，0.99/1.00)4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-氨基苯甲酸在70℃，氮气氛下将4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-硝基苯甲酸(19.8mg，0.065mmol)和SnCl2·2H2O(73mg)在乙醇(2.0ml)中的混合物加热5.5小时。冷却后加入2.0ml水并通过加入碳酸氢钠(5%水溶液)使pH至弱碱性(pH7～8)，然后用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂得到4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-氨基苯甲酸8.4mg。
1H NMR(CD3OD)δ6.93(s，1H)，4.80(br，4H)，3.89(q，J＝7.0Hz，2H)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H).13C NMR(CD3OD)δ171.73，147.72，145.07，137.91，109.46，108.72，107.25，67.05，15.71.MS(TSP)m/z 278/276(M+1).
实施例7(方法D)5-溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸向与450ml乙酸混合的3-羟基-2-氨基乙酸[4](5g，32.6mmol)中滴加50ml乙酸中的溴(10.4g，65.2mmol)。室温下将悬浮液搅拌1小时，然后蒸发。将残余物溶于60ml甲醇，加30ml水使其沉淀，过滤并干燥得5-溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸7.38g，m.p.210℃。1H NMR(DMSO-d6)δ10.20(br，1H)，8.5(br，1H)，7.26(d，J＝2.4Hz，1H)，6.84(d，J＝2.2Hz，1H)，3.4(br，2H)，13C NMR(DMSO-d6)δ168.92，146.27，140.99，123.14，118.92，111.02，104.31.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)233/231(M+，0.14/0.13).
4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸将5-溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸(7.38g，31.8mmol)溶于甲醇(120ml)中，加入用溴化氢饱和的二氯甲烷250ml，随后加入二氯甲烷300ml。室温下48小时后蒸去溶剂。将8.92g残余物溶于400ml乙酸，室温下在20分钟内滴加50ml乙酸中的溴化氢(100ml，48%水溶液)和溴(5.50g，34.4mmol)。将温度升至70℃并加入另外的在50ml乙酸中的(5.50g，34.4mmol)溴。14小时后在90℃蒸去溶剂和过量的溴得到20g粗产物，将其溶于45ml甲醇并用300ml水使其沉淀。过滤并干燥得到4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸8.45g。m.p.223℃(分解)。
223℃(dec).1H NMR(DMSO-d6)δ9.3(Br，1H)，5.3(Br，1H)，7.56(s，1H).13C NMR(DMSO-d6)δ168.67，143.18，142.64，125.91，117.83，110.24，106.98.MS(EI，70eV)m/z(相对强度)313/311/309(M+，0.51/1.0/0.51)4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸盐酸化物将4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸(7.00g，22.5mmol)在85ml甲醇中加热，过滤并加入HCl/Et2O(≈10ml)和Et2O(120ml)，滤出盐酸化物并将滤液浓缩。加入乙醚以沉淀出更多的产物，用乙醚洗涤全部产物并干燥得到4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸盐酸化物5.38g。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.56(s，1H)，6.0(br，5H).
13C NMR(DMSO-d6)δ168.89，143.53，142.54，125.86，117.90，110.31，107.20.MS(EI，70eV)m/z 313/311-/309(M+，0.51/1.0/0.50).
实施例8(方法F)4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸甲酯将3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸盐酸化物[5](50mg，0.23mmol)溶于乙酸(2.5ml)，用氩气冲洗并滴加2.5ml乙酸中的溴(36mg，6.23mmol)。室温下3小时后，避光加入另外的1ml乙酸中的溴(18mg，0.11mmol)，将其在室温下放置过夜。在减压下蒸去乙酸和过量的溴，并与水(2×5ml)和甲醇(3×5ml)共同蒸发至干。用制备性薄层色谱(SiO2)提纯，首先使用氯仿-甲醇-氨(300∶10∶1)，继而使用氯仿-甲醇(1000∶1)为洗脱剂得到4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸甲酯(9mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.22(s，1H)，6.25(br，3H)，3.74(s，3H)，2.17(s，3H).MS(EI，70eV)m/z-(rel.int.)261/259(M+，0.85/0.86).
4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸将4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸甲酯(14mg，0.05mmol)溶于EtOH(0.7ml)并用氩气冲洗。加入KOH水溶液(0.35ml，0.05mmol)，在40℃避光下将反应物保持6小时。用2M HCl酸化至pH 2后蒸去水，残余物用冰水(0.1ml)研制并浓缩至干燥。用制备性HPLC(Lichrosorb-C18，MeOH-0.05M NH4OAc(水溶液)，40∶60)提纯，得到4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸2mg。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.23(s，1H)，3.35(br，2H)，2.13(s，2H)，2.05(s，3H).MS(EI，70eV)m/z(相对强度)247/245(M+，0.82/0.86).
实施例9(方法D)5-溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸将3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸[6](138mg，0.83mmol)溶于HOAc(6ml)并用氩气冲洗。加入溴(85μl，1.65mmol)并将反应物放置过夜。蒸去溶剂后与HOAc共同蒸发，加入5ml HOAc。然后将反应混合物用氩气冲洗，加入Br2(50μl，0.97mmol)，室温下将反应物放置24小时。通过与HOAc蒸发四次，与甲苯蒸发二次共沸除去HBr。将残余物溶于1.5ml MeOH，过滤并加入水1.5ml以沉淀产物。浓缩滤液，沉淀出更多的产物，共得到80mg5-溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸。1H NMR(DMSO-d6)δ10.16(br，1H)，7.36(d，J＝2，2Hz，1H)，6.99(d，J＝2.3Hz，1H)，3.5(br，2H)，2.93(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)δ168.90，150.03，139.86，123.81，121.46，117.93，109.05，33.43.MS(TSP)m/z(相对强度)248/246(M+1，1.0/0.98)4，5-二溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸将5-溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸(43mg，0.17mmol)与HOAc(3ml)混合并用氩气冲洗。加入48%HBr(水溶液)(600μl，5.3mmol)和溴(18μl，0.35mmol)并将反应物加热至70℃达14小时，避光。再加入溴(5μl，0.10mmol)并将反应混合物再加热18小时。蒸发混合物并将残余物与HOAc共同蒸发，真空干燥。通过用乙醚洗涤粗产物的1M
HCl溶液，然后蒸发水相使产物提纯，得到4，5-二溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸16mg。
1H NMR(CD3OD)δ8.07(s，1H)，4.97(br，3H)，3.15(s，3H).MS(TSP)m/z(相对强度)328/326/324(M+1，0.53/1.0/0.48)实施例10(方法E)4，5-二溴-3-羟基-N，N-二甲基-2-氨基苯甲酸将4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸盐酸化物(100mg，0.29mmol)溶于(含甲醛115μl，37%水溶液，1.44mmol)的10ml乙腈。加入NaCNBH3(55mg，0.87mmol)并将反应物在室温下放置0.5小时，随后加入HCl(4M在MeOH中)并蒸发。将残余物与MeOH、HOAc和MeOH共同蒸发。粗产物用柱色谱(SiO2，CH3Cl-MeOH-HOAc100∶40∶1)提纯得到4，5-二溴-3-羟基-N，N-二甲基-2-氨基苯甲酸80mg。1H NMR(DMSO-d6)δ8.83(br，1H)，7.48(s，1H)，2.92(s，6H)，13C NMR(DMSO-d6)δ172.58、166.78、156.62、135.77、127.83、123.58、120.82、41.09。MS(TSP)m/z(相对强度)342/340/338(M+，0.51/1.0/0.53)。
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246，15-9(1908)药用方法原料[羧基-14C]3-羟基-2-氨基苯甲酸(6mCi/mmol)由Drs.E.Shaskan和L.Spitznagle提供(University of Connecticut，Farmington，CT，U.S，A.)。QUIN由Nuclear Research Center(Negev，Israel)提供。所有其它化学药品与试剂由商业供给途径获得。
组织制备为进行常规试验将雄性Sprague-Dawley鼠(150-200g)用断头术杀死并将其大脑快速分离至冰中。将全部前脑及单个的CNS区在四倍体积(wt/vol)的蒸馏水中进行声波处理，在4℃，以50，000g离心20分钟，将所得上层清液用于本试验。使用Mena等的方法(1980)进行亚细胞结构分离，收集下述部分P1(核部分)，P2(粗突触体部分)，P3(微粒体部分)，可溶的(细胞溶质部分)，髓磷脂，突触体和线粒体。所有不溶部分于实验前先用声波处理。
3HAO活性测定为了常规实验，在抑制剂存在或不存在(在10μl中)时将20μl组织提取物(相当于5mg湿重的原始组织)于37℃在一溶液中孵育30分钟，该溶液含有0.3mM Fe(SO4)2，38mM 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES/NaOH)缓冲溶液(pH 6.0)，和5μm[14C]3HANA，其总体积为195μl。在相同条件下使用在沸水浴中加热5分钟的组织以获得空白值。通过加入50μl 6%HClO4以中止孵育，将试管在冰中冷却，在Beckman小型离心机中离心2分钟以除去沉淀。将220μl上层清液加至Dowex 50W(200-400目)离子交换柱(0.5×2cm)。以1ml蒸馏水洗涤该柱收集到产生的[14C]QUIN。将5.5ml闪烁液加至洗脱物中，并用液体闪烁分光仪测定其放射性。初步的实验表明90-95%的[14C]QUIN在此过程中被收集，同时，未被反应的[14C]3HANA留在柱上。
药用制剂本发明的新的治疗方法的给药可通过常规的口服、直肠，或肠胃外给药，服用的剂量可以是，例如，约1～3000mg/Kg，优选的是10～1000mg/Kg，特别优选的是约25～250mg/Kg并且可以每天每1～4小时给药，剂量由给药途径决定，特别优选的途径为使用含式Ⅰ化合物的水溶液进行静脉注射。疾病的严重程度、病人的年龄及其诊治医生通常考虑的因素将影响对于个别病人的最合适的给药方案的剂量，这一点将会被了解到。
含有本发明化合物的药物制剂可以是常规的片剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、粉剂或粒剂以用于口服给药;无菌非胃肠性溶液或悬浮液以用于非胃肠给药;或是栓剂以用于直肠给药。
将含本发明化合物的药物制成用于口服的剂量，如将乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉，如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉、纤维素衍生物、一种胶粘剂如明胶或聚乙烯吡咯烷酮，及一种润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡及类似物压制成片。如要求包衣片剂，如上制备药芯部分，可用阿拉伯胶、明胶、滑石、二氧化钛及类似物包衣。另外，还可将现有技术中已知的聚合物溶于易挥发有机溶剂或有机溶剂的混合物以对片剂进行包衣。可由这些包衣中加入染料以便与于区别含不同活性物质或不同活性化合物含量的片剂。
为制备软胶囊剂，可将有效物质与如一种菜油或聚乙二醇混合。硬胶囊剂可含有有效物质的颗粒，其使用上述制片剂的赋形剂，如乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉(如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉)，纤维素衍生物或明胶。还可将液体可半固体的药物充填至硬胶囊中。
直肠给药的药剂单位可以是溶液或悬浮液，或制成含混有中性脂肪基质的有效物质的栓剂，可含有与菜油或石蜡油混合的有效成分的直肠胶囊剂。
口服给药的液体可制成糖浆或悬浊液形式，如含0.2%～约20%(wt)此处所述有效物质的溶液，使用糖和乙醇、水、甘油和亚丙基乙二醇平衡。可选择地将该液体制备成含有色素、香味剂、甜味剂和羧甲基纤维素为增稠剂或含有现有技术中已知的其它赋形剂。
可将通过注射进行非肠胃给药的溶液制成有效物质的水溶性药用可接受盐的水溶液，优选的浓度为从约0.5%至约10%(wt)，这些溶液还可含有稳定剂和/或缓冲剂，以及可常规地按各种剂量单位的瓿剂提供。
1.通式Ⅰ的化合物或其药用可接受的盐
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基；和X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1和/或R2代表直链或支链的低级烷基。
3.根据权利要求2的化合物，其中所述的烷基为C1-C6烷基。
4.根据权利要求1的化合物，其中的X和/或Y代表直链或支链的低级烷基。
5.根据权利要求4的化合物，其中所述的烷基为C1-C6烷基。
6.根据权利要求1的化合物，其中X和/或Y代表低级烷氧基。
7.根据权利要求6的化合物，其中所述烷氧基为C1-C6烷氧基。
8.根据权利要求1的化合物，其中X和/或Y代表选自碘、氟、氯和溴卤素。
9.根据权利要求1的化合物，其由5-溴-4-氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸;4，5-二氯-3-羟基-2-氨基苯甲酸;4-溴-5-乙氧基-3-羟基-2-氨基苯甲酸;4，5-二溴-3-羟基-2-氨基苯甲酸;4-溴-3-羟基-5-甲基-2-氨基苯甲酸;4，5-二溴-3-羟基-N-甲基-2-氨基苯甲酸，和其药用可接受的盐组成。
10.制备权利要求1中的式Ⅰ化合物的方法，通过A)如果R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，Y选自Cl，Br和I，X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3;卤化式Ⅱ化合物，其中R1，R2和X同上A)中定义
或B)如果R1和R2为H，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;除去式Ⅲ化合物保护基，其中R1、R2、X和Y同上B)中定义，PG为保护基;
或C)如果R1和R2为H，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;还原式Ⅳ化合物，其中X和Y同上C)中定义，
或D)如果R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X为Cl，Br式I及Y为选自烷氧基、烷基、氟烷基和卤素;卤化式Ⅴ化合物，其中R1、R2和Y同上D)中定义，
或E)如果R1为烷基，R2为H或烷基和X与Y为选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;将式Ⅵ化合物烷基化，其中X和Y同上E)中定义，
或F)如果R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3;将式Ⅶ化合物脱酯基，其中R1、R2、X和Y同上F)中定义，且R3选自烷基、苄基、1，1，1-三氯乙基和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)。
11.一种药物制剂，其含有为活性组分的权利要求1的化合物及一种药用可接受的载体。
12.根据权利要求1的化合物用于治疗。
13.同权利要求12中定义的化合物用为预防或治疗神经变质药剂。
14.根据权利要求1的化合物用于制备预防或治疗神经变质的药物。
15.一种用于预防或治疗神经变质的方法，通过给需要该种治疗的寄主使用足够量的权利要求1的化合物。
16.通式Ⅱ的化合物
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，和X选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3，附带条件为不包括其中R1和R2为H和X为OMe，OEt，Cl，Br或F的式Ⅱ化合物。
17.通式Ⅲ的化合物，
其中X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3，PG为保护基，附带条件为不包括其中PG为Me，X为OMe和Y为OMe;PG为Me，和X与Y为Cl;及PG为Me，X为OMe和Y为Cl的式Ⅲ化合物。
18.通式Ⅳ的化合物
其中X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
19.通式Ⅴ的化合物
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，及Y选自烷氧基、烷基、氟烷基、卤素、腈、OCF3和SCF3。
20.通式Ⅵ化合物
其中X和Y为选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3。
21.通式Ⅶ化合物
其中R1和R2为相同或不同的并选自H和烷基，X和Y为相同或不同的并选自烷氧基、烷基、烷基硫代、氟烷基、卤素、羟基、腈、OCF3和SCF3及R3选自烷基、苄基、1，1，1-三氯乙基和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)。
本发明涉及通式I的3-羟基-2氨基苯甲酸的新的衍生物，其制备方法，新的药物组合物及用其抑制3-羟基-2-氢基苯甲酸盐氧合酶，3-HAO的用途，该酶导致内源神经毒素喹啉酸(QUIN)的产生。
文档编号A61P43/00GK11087
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者S·K·M·比约克, B·K·卡彭特, K·B·戈特哈马, C·E·哈格堡, T·赫格堡, M·T·林德堡, R·许瓦茨, G·B·施滕宁 申请人:阿斯特拉公司, 马利兰州大学(巴尔的摩)}